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  • 联合检测尿总蛋白避免尿微量白蛋白钩状效应的方法

    发布时间:2021-06-01 来源:未知

      摘    要:目的 分析尿总蛋白(TP)和尿微量白蛋白(mAlb)的相关性,建立避免钩状效应导致的尿mAlb假阴性的方法。方法 收集1 711例患者尿mAlb和尿TP检测数据,采用Spearman相关分析评估尿mAlb与尿TP的相关性,建立线性回归方程。采用35份检测尿mAlb时有钩状效应的尿液样本进行验证。结果 尿TP与尿mAlb呈正相关(r=0.880,P=0.000)。以尿TP为因变量(Y),尿mAlb为自变量(X),建立的线性回归方程为:Y=116.361+1.245X(r2=0.921,P=0.000)。将发生钩状效应的35份样本的尿mAlb检测值(记为尿mAlb钩状)代入方程,计算得到尿TP值(记为尿TP钩状),随后将尿液样本稀释并检测尿mAlb,将检测结果记为尿mAlb稀释,代入方程后计算尿TP值(记为尿TP稀释)。尿TP实测与尿TP钩状差异有统计学意义(P<0.001),与尿TP稀释差异无统计学意义(P>0.05)。结论 建立尿TP与尿mAlb的线性回归方程可简单地判断尿mAlb检测时是否存在钩状效应。该方法简单、不受仪器和试剂的限制,可在临床上推广。
      
      关键词:微量白蛋白; 总蛋白; 尿液; 钩状效应;
      
      Combined detection of urinary total protein to avoid the hook effect of urinary microalbumin
      
      Danqu Luosangcizhen Zerenqucuo MA Chaochao LIU Zhijuan
      
      Department of Clinical Laboratory,Tibet Autonomous Region People's Hospital Department of Clinical Laboratory,Peking Union Medical College Hospital
      
      Abstract:
      
      Objective To analyze the correlation between urinary total protein(TP) and urinary microalbumin(mAlb),and to find a method for avoiding the false negativity of urinary mAlb caused by hook effect.Methods The results of urinary mAlb and urinary TP of 1 171 patients were collected,and the correlation between them was evaluated by Spearman correlation analysis.Linear regression equation was established.Totally,35 urine samples with hook effect were validated for urinary mAlb.Results Urinary TP was positively correlated with urinary mAlb(r=0.880,P=0.000).Taking urinary TP as dependent variable(Y),urinary mAlb as independent variable(X),the linear regression equation was established,Y=116.361+1.245X(r2=0.921,P=0.000).By substituting the urinary mAlb determination values of 35 samples with hook effect(recorded as urinary mAlbhook)into the equation,urinary TP(recorded as urinary TPhook) was calculated,urine samples were diluted,and urinary mAlb was determined.The results were recorded as urinary mAlbdilution.After substituting the equation,the urinary TP value(recorded as urinary TPdilution) was calculated.There was statistical significance between urinary TPmeasured and urinary TPhook(P<0.001),and there was no statistical significance with urinary TPdilution(P>0.05).Conclusions According to establishing the linear regression equation between urinary TP and urinary mAlb,whether there is a hook effect in urinary mAlb deterimination can be determined simply.This method is simple and not limited by instruments and reagents,which can be popularized in clinic.
      
      Keyword:
      
      Microalbumin; Total protein; Urine; Hook effect;
      
      尿微量白蛋白(microalbumin,m Alb)在肾脏早期损伤的诊断和治疗中有重要的参考价值[1]。尿白蛋白/肌酐比值(albumin to creatinine ratio,ACR)已成为慢性肾脏疾病筛查和分期的重要指标之一[2,3]。目前,尿m Alb的检测方法主要有免疫散射比浊法、免疫透射比浊法和放射免疫分析法、时间分辨免疫分析法等。免疫透射比浊法与免疫散射比浊法有较高的一致性[4],但由于方法学的原因,免疫透射比浊法难以避免产生钩状效应。虽然已有样本预稀释和抗原过量检查、反应特征曲线设置和报警、计算反应完成率等新技术[5,6,7,8]可用于避免钩状效应,但不同仪器和试剂的参数设置和功能不同,上述新技术不具有普遍适用性。有些开放系统甚至无任何钩状效应的预防措施。本研究拟通过尿总蛋白(total protien,T P)与尿m A l b的联合检测,构建线性回归模型,在结果审核时以该方程为验证规则,以避免免疫透射比浊法检测尿m Alb时的钩状效应。
      
      1 材料和方法
      
      1.1 研究对象
      
      选取2018年1—12月西藏自治区人民医院同时检测尿m Alb和尿TP的患者1 711例,其中男943例、女768例,年龄18~78岁。另收集检测尿m Alb时产生钩状效应的阴性或弱阳性尿液样本35份。
      
      1.2 试剂与仪器
      
      尿m Alb试剂盒(免疫透射比浊法)和配套校准品购自四川迈克生物科技股份有限公司。脑脊液/尿TP试剂盒(邻苯三酚红钼比色法)7170瓶型和配套校准品购自四川新健康成生物股份有限公司。检测仪器为ARCHITECT C16000全自动生化分析仪(美国雅培公司)。尿液化学质控品购自美国伯乐公司(货号为397、398,批号为68521、68522,有效期至2019年12月31日)。本实验室2018年度尿m Alb中、高水平质控品的室内变异系数(coefficient of variation,CV)分别为4.83%、4.43%,尿TP中、高水平质控品的室内CV分别为3.19%和2.05%,2018年国家卫生健康委临床检验中心室间质量评价成绩合格。
      
      1.3 方法
      
      收集所有对象的晨尿,盛集于洁净的容器内,30 min内完成检测。浑浊尿液采用1 200×g离心10 min,取上清液进行检测。排除影响尿m Alb和尿TP检测结果的非病理性因素(各种因素引起的尿液污染)。
      
      以尿TP为因变量(Y),尿m Alb为自变量(X),建立线性回归方程。将发生钩状效应的35份样本的尿m Alb检测值(记为尿m Alb钩状)代入线性回归方程,计算得到尿TP值(记为尿TP钩状),随后将尿液样本稀释并检测尿m Alb,将检测结果记为尿m Alb稀释,代入方程后计算尿TP值(记为尿TP稀释),与尿TP实测值(尿TP实测)进行比较。
      
      1.4 统计学方法
      
      采用Excel 2010软件及SPSS 25.0软件进行统计分析。采用Kolmogorov-Smirnov检验进行正态性检验。尿TP结果呈偏态分布,经对数转换后呈正态分布。采用Spearman相关分析评估尿m Alb与尿TP的相关性。以尿m Alb检测值为X,尿TP检测值为Y,绘制散点图,建立线性回归方程。不同方法得出的尿TP结果之间的比较采用Dunni检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
      
      2 结果
      
      2.1 尿TP与尿m Alb的相关性及线性回归方程
      
      S p e a r m a n相关分析结果显示,尿T P与尿m Alb呈正相关(r=0.880,P=0.000)。以尿TP为因变量(Y),尿m Alb为自变量(X),建立线性回归方程:Y=116.361+1.245X(r2=0.921,P=0.000)。见图1。
      
      图1 尿m Alb与尿TP的相关性
      
      2.2 审核规则的验证
      
      把线性回归方程列入实验室信息系统(laboratory information system,LIS)的审核规则中进行验证。结果显示,尿TP实测与尿TP钩状比较,差异有统计学意义(P<0.001);与尿TP稀释比较,差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。
      
      表2 尿TP实测、尿TP钩状和尿TP稀释检测结果对数值与实测值的比较
      
      3 讨论
      
      免疫比浊法是基于抗原抗体反应的检测方法,而抗原抗体反应的特点就是抗原和抗体等比例反应。当抗原或抗体过量时,就会产生钩状效应,可导致假阴性或弱阳性结果。为了保证检验结果的准确,仪器和试剂厂商采取各种措施来避免钩状效应的产生。但并不是所有的检测项目都适用这些方法。因此,本研究通过建立尿TP和尿m Alb的线性回归方程来判断是否产生了钩状效应,为部分无力购置昂贵设备的基层医院提供新的思路。
      
      白蛋白从肾小球滤过后,绝大部分在肾小管被重吸收,正常人尿中白蛋白含量极微。但在一些早期的肾脏病变中,尿m Alb水平会升高。因此,尿m Alb和ACR已在临床上被普遍用于肾脏疾病的诊断。目前,尿m Alb的检测方法主要为免疫比浊法,某些仪器具有监测反应曲线和带检查报警的功能,可以提示钩状效应的发生[9],但一些型号较老的仪器没有这些功能。因此,临床实验室需要一种较为简单的方法来提示钩状效应的发生。
      
      本研究结果显示,尿TP与尿m Alb呈正相关(r=0.880,P=0.000),可建立一元线性回归方程,在一定程度上反映了尿TP与尿m Alb之间的关系。当发生钩状效应时,尿m Alb和尿TP之间的关联性不能满足一元线性回归方程。因此,可以把建立的线性回归方程作为一个经验公式,用于尿m Alb检测结果的审核。各临床实验室可建立适合自己实验室的线性回归方程,并定期验证。有条件的实验室应参照WS/T 616—2018《临床实验室定量检验结果的自动审核》的要求,分析尿TP与尿m Alb之间的相关性,进一步挖掘二者间的关系,深入揭示二者在疾病发展和治疗中的病理生理特征,以便更好地为临床服务。
      
      综上所述,虽然不同的肾脏疾病尿TP的成分及水平均有一定的差异[10,11],但尿m Alb与尿TP的比值在一定程度上可反映疾病的类型。联合检测尿TP和尿m Alb虽然稍微增加了患者的负担,但最终的检测结果更为准确,有助于临床对病情的判断。由于本研究的样本量较小,建立的线性回归方程尚不能完全反映尿m Alb与尿TP之间的关系,因此还有待进一步扩大样本量进行验证。
      
      参考文献
      
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